ABSTRACT
Die Hauptprotease von SARS‐CoV‐2 (Mpro), dem Auslöser von COVID‐19, ist ein wichtiges Arzneistoff‐Target. Ein neues fluorogenes Substrat, das kinetisch mit einem intern gequenchten fluoreszierenden Peptid verglichen wurde, erwies sich als ideal geeignet für ein Hochdurchsatz‐Screening mit rekombinant exprimierter Mpro. Zwei Klassen von Protease‐Inhibitoren, Azanitrile und Pyridylester, wurden identifiziert, optimiert und biochemisch charakterisiert. Maßgeschneiderte Peptide mit einer reaktiven Azanitril‐Kopfgruppe zeigten eine duale Inhibition von Mpro und Cathepsin L, einer Protease, welche die virale Zellinvasion befördert. Zur Optimierung der Pyridylindolester wurde ein Positions‐Scanning durchgeführt. Unser fokussierter Ansatz zur Entwicklung von Mpro‐Inhibitoren erwies sich dem virtuellen Screening als überlegen. Mit den beiden irreversiblen Inhibitoren Azanitril 8 (kinac/Ki=37 500 m−1 s−1, Ki=24.0 nm) und Pyridylester 17 (kinac/Ki=29 100 m−1 s−1, Ki=10.0 nm) wurden vielversprechende Kandidaten für die zukünftige Arzneistoffentwicklung entdeckt.